В центре сюжета Resident Evil Requiem находятся сразу два ключевых героя - Грейс Эшкрофт и Леон С. Кеннеди. Именно вокруг них строится основная история.
Грейс Эшкрофт - один из новых центральных персонажей. Молодая девушка, работающая на ФБР, довольно хрупкая, поэтому её линия воспринимается более напряжённой и уязвимой. Это заметно отличает её от привычных героев серии, которые чаще действуют увереннее и агрессивнее.
Леон Кеннеди - один из самых известных героев всей серии Resident. В прошлом он был молодым полицейским, который в свой первый рабочий день оказался в эпицентре катастрофы в Раккун-Сити. После тех событий Леон прошёл долгий путь и превратился в опытного правительственного агента, не раз сталкивавшегося с биологическим оружием, вспышками заражения и крупными международными заговорами. К моменту Requiem он уже давно известен как один из самых надёжных специалистов в борьбе с подобными угрозами. До событий новой игры Леон продолжал работать на государственные структуры США и занимался расследованиями, связанными с опасными биологическими инцидентами. В Resident Evil Requiem Леон расследует серию подозрительных смертей и выходит на события, которые ведут к новой вспышке ужаса.
Алисса Эшкрофт - пожалуй, самый значимый второстепенный персонаж для сюжета. Это журналистка-расследователь и одна из выживших после катастрофы в Раккун-Сити, знакомая давним фанатам по Resident Evil Outbreak. В Requiem она важна не только сама по себе, но и как мать Грейс: именно её прошлое, смерть и связь с делом становятся одной из эмоциональных опор истории. То есть Алисса - не просто камео для фанатов старых частей, а персонаж, через которого раскрывается мотивация главной героини.
Натан Демпси играет более «служебную», но сюжетно важную роль. По официальному пресс-описанию Capcom, это руководитель или непосредственный начальник Грейс в ФБР, который знает о её травме, связанной со смертью матери, и всё равно поручает ей расследование нового дела.
Эмили поначалу представлена как хрупкая девочка, которую Грейс находит запертой в центре ухода. Она выглядит истощённой и болезненной, из-за чего сначала воспринимается скорее как жертва происходящего.
Виктор Гидеон - одна из самых зловещих фигур Requiem. Это бывший учёный Umbrella, одержимый проектом «Элпис» и последствиями катастрофы в Раккун-Сити. Задолго до событий игры он занимался секретными исследованиями и проводил опыты над выжившими, у которых проявлялись признаки так называемого синдрома Раккун-Сити. Уже в самой игре Гидеон выступает как скрытый организатор происходящего и как главный двигатель всей трагедии: именно он стоит за экспериментами, манипуляциями и охотой за людьми, которых считает связанными с «Элписом». В каноничной концовке именно Гидеон становится финальным боссом для Леона.
